Холинэстераза

ХОЛИНЭСТЕРАЗА

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат.№. Количество Реагент Хранение
AD1001CS 4 x 40мл Холинэстераза - 1 2-8°C
4 x1 0мл Холинэстераза - 2

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для количественного определения холинэстеразы в сыворотке и плазме на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Два родственных энзима способны расщепить ацетилхолин. Один из ферментов называется холинэстераза или холинэстераза I, другой – псевдохолинэстераза или холинэстераза II. Холинэстераза I отвечает за быстрый гидролиз ацетилхолина в нервных окончаниях с промежуточной трансмиссией нейрального импульса через синапсис. Измерение уровня холинэстеразы необходимо при:

  1. Возможной инсектицидной интоксикации.
  2. Определении атипических форм фермента.
  3. Выполнении печеночных проб.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Холинэстераза катализирует расщепление бутирилтиохолина в тиохолин и бутират в присутствии гексацианоферрат калия (III) (желтого цвета). Гексацианоферрат калия (III) превращается в гексацианоферрат калия (II) – бесцветный. Абсорбция в образце снижается пропорционально активности холинэстеразы.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики.

Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить показания анализа.

Цвет и вид компонентов:

Реагент 1: прозрачная светло-желтая жидкость

Реагент 2: прозрачный бесцветный жидкость

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности:

В соответствии с европейскими стандартами продукт не представляет опасности. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности:

  1. Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
  2. Храните в защищенном от солнечных лучей месте, избегайте загрязнения и испарения реагента.
  3. Закупорьте флакон сразу же после использования и храните при t 2-80С.
  4. Не замораживайте реагенты.
  5. Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
  6. Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
  7. Следуйте требованиям по утилизации продукта.

ОБОРУДОВАНИЕ:

Описание по использованию оборудования предоставляется по запросу.

СОСТАВ НАБОРА:

Компоненты Ингредиенты Концентрация
Реагент 1 Пирофосфатный буфер pH 7.7 65.0 ммоль/л
Гексацианоферрат (III) 2.0 ммоль/л
Реагент 2 Goods буфер pH 4.0 20.0 ммоль/л
Бутирилтиохолин йодид 65.0 ммоль/л

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ:

Перед использованием аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом.

При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на этикетке.

Монореагентная методика: смешайте 1 мл Реагента 2 с 4 мл Реагента 1. При температуре 2-8°C рабочий реагент стабилен 30 дней.

Биреагентная методика: жидкие Реагенты 1и 2 готовы для использования.

После вскрытия, при правильном хранении, компоненты остаются стабильными до окончания срока годности.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку, свободную от гемолиза, гепарин/EDTA плазму. НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ цитратную, оксалатную и фторидную плазму. При работе с образцами рекомендуется придерживаться требований NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец должен набираться только в специально предназначенный для этого контейнер. Сыворотку/плазму необходимо отделить от клеток крови немедленно после забора крови.

Стабильность: до 15 дней при 2-8°C.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Описание Кат. № Описание Кат. №
Калибратор AD983 Фотометр нет
Универсальные контрольные сыворотки Уровень 1 AD922 Общее лабораторное оборудование нет
Универсальные контрольные сыворотки Уровень 2 AD932 Соляной раствор 0.9 г/л NaCl нет

Процедура определения:

Длина волны: λ = 405 (400 - 440) нм

Температура: 37°C

Оптический путь: 1 см

Реакция: «Кинетическая» (убывающая)

Перед использованием нагрейте реагент до 15-250С. Объемы могут пропорционально измениться.

Монореагентная методика «стартовый образец» Бланк Образец
Рабочий реагент 1000 µл 1000 µл
Дистиллированная вода 15 µл -----
Образец ----- 15µл
Аккуратно смешайте инкубируйте1 мин. при 37°C Снимите точные показания спектральной поглощательной способности бланка и образца в течение 1,2,3 минут и высчитайте среднее в минуту. Подсчитайте изменение оптической плотности в минуту (∆OD/мин).

Примечание: спектральная поглощательная способность рабочего реагента должна быть как минимум 1.000 при λ = 405 нм.

Биреагентная методика: «стартовый субстрат» Бланк Образец
Рабочий реагент 800µл 800µл
Дистиллированная вода 15µл ----
Образец ---- 15µл
Аккуратно смешайте, инкубируйте 1 мин. при 37°C затем добавьте:
Реагент 2 200µл 200µл
Аккуратно смешайте, инкубируйте 4 мин. при 37°C. Снимите точные показания спектральной поглощательной способности бланка и образца в течение 1,2,3 минут и высчитайте среднее в минуту. Подсчитайте изменение оптического расстояния в минуту (∆OD/мин).

Калибровка:

Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор:

  1. Используете новый набор или меняете номер партии реагентов.
  2. Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
  3. Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:

Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.

  1. Контроли должны подвергаться анализу:
  2. Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
  3. Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
  4. В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

Холинэстераза [U/l] = ∆ OD/min x 62000. Коэффициент фактора и реагента до λ = 405 нм при 37°C.

(Коэффициент пересчета: μkat/l = ед/л x 0 0167).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

В сыворотке и плазме при t 37°C ед/л µKat/l
Взрослые мужчины 5100 – 11700 85 – 195
Взрослые женщины 4000 – 12600 69 – 210
Дети до 6месяцев От 40% до 50% активность выше, чем у взрослых

Каждая лаборатория должна установить свою собственную нормированную область значений.

РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность: Линейность до 12000 ед/л (200 µkat/l. Соответствует ∆OD/мин - 0.200 при 405 нм).

Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:1 с 0.9% NaCl (9г/л) и еще раз подвергните анализу. Результат увеличить в 2 раза.

Интерференция:

Желтуха: нарушение менее 10% при показателях билирубина (и фракций) до 600 µмоль/л.

Липемия: нарушение менее 10% при показателях интралипидов до 5 г/л.

Чувствительность: 43 ед/л (0.05 µkat/l).

Точность:

Внутрисерийная N = 30 Среднее значение (ед/л) SD % CV Межсерийная N = 15 (3 дня) Среднее значение (ед/л) SD % CV
Уровень 1 3709.00 65.67 1.77 Уровень 1 3691.91 76.76 2.08
Уровень 2 7487.07 65.49 0.87 Уровень 2 7455.38 68.41 0.92

Метод сравнения:

Сравнение 21 образцов с использованием этих реагентов холинэстеразы (y) и другими доступными реагентами (x), дают следующий коэффициент корреляции r = 1.000.

БИБЛИОГРАФИЯ:

  1. Deutsche Gesellshaft für Klinische Chemie: “Proposal of Standard Methods for the Determination of enzyme catalytic concentrations in serum and plasma at 37°C, II. Cholinesterase (Acylcholine Acylhydrolase) “. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 30, 163 (1992).
  2. Knedel B. Boettger R. Klin. Wschr. 45, 325, (1967).
  3. Jakobs DS. Kasten Jr BL. Demmott WR. Wolfson WL.: “Laboratory Test Handbook” Lexi-Comp and Williams & Wilkins Ed. (2nd Edition – 1990).
  4. Kaplan LA. Pesce AJ.: “Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1996).
  5. C. A. Burtis, E.R. Ashwood. Tietz Fund. Of Clin. Chem. 5th ed. 30:54 and 385:386.
Контактный телефон: +38 (044) 272-19-23
Адрес: г. Киев, ул. Рейтарская, 18