Кислая фосфатаза

КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат.№.	Количество	Реагент	Хранение
AD631P	1x110 мл	Буфер	2-8°C
	10x10 мл	Субстрат
	1x6 мл	Тартрат
	1x5 мл	Стабилизатор

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для определения кислой фосфатазы в сыворотке на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Определение активности кислой фосфатазы проводится для диагностики рака предстательной железы.
Повышенный уровень кислой фосфатазы в сыворотке также может быть показателем гематологической болезни, например, миелоцитарная лейкемия; заболевания костей, например, болезнь Педжета, а так же других раковых и печеночных болезней.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Кислая фосфатаза катализирует гидролиз нафтил фосфата. Нафтил получается путем реакции с быстрым красным раствором соли, выделяя азокраситель. Повышение спектральной поглощательной способности в результате образования азокрасителя прямо пропорционально концентрации кислой фосфатазы в образце.
В присутствии тартрата предстательный изоэнзим полностью угнетен, что позволяет определить не простатическую фракцию кислой фосфатазы.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики.
Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить показания анализа.

Цвет и вид компонентов:
Реагент 1: прозрачный бесцветный раствор
Реагент 2: белый порошок
Реагент 3: белый порошок
Реагент 4: прозрачный бесцветный раствор

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности:
В соответствии с европейскими стандартами продукт не представляет опасности. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности:

• Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
• Не замораживайте реагенты.
• Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
• Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
• Следуйте требованиям по утилизации продукта.

ОБОРУДОВАНИЕ:

Описание по использованию оборудования предоставляется по запросу.

СОСТАВ НАБОРА:

Компоненты		Ингредиенты	Концентрация в тестах
Реагент 1	Буфер	Цитратный буфер	85 ммоль/л
Реагент 2	Субстрат	Нафтил фосфата	3 ммоль/л
		Быстрый красный раствор соли	1.2 ммоль/л
Реагент 3	Тартрат	Тартрат	500ммоль/л
Реагент 4	Стабилизатор	Ацетатный буфер	3000ммоль/л

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ:

Буфер Реагента 1 готов для использования. При температуре 2-8 0C - стабилен до окончания срока годности.
Реагент 2: Растворите Реагент 2 в 10мл буфера Реагента 1.
При температуре 2-8 0C, в защищенном от солнечных лучей месте - стабилен 5 дней.
Реагент 3: Растворите Реагент 3 в 6 мл дистиллированной воды и аккуратно перемешайте. При температуре 2-8 0C, в защищенном от солнечных лучей месте - стабилен 4 месяца.
Реагент 4 готов для использования. При температуре 2-8 0C - стабилен до окончания срока годности. Для определения общей кислой фосфатазы используйте восстанавливающий Реагент 2. Для определения непростатичекой килой фосфатазы добавьте 350 мкл восстанавливающего Реагента 3 и 1 флакон восстанавливающего Реагента 2. При температуре 2-8 0C он будет стабилен 5 дней.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку. Сыворотка должна быть стабилизирована, путем добавления 20 мкл Реагента 4 к 1 мл сыворотки в течение часа после отделения сыворотки от сгустков. При работе с образцами рекомендуется придерживаться требований NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец должен набираться только в специально предназначенный для этого контейнер. Сыворотку/плазму необходимо отделить от клеток крови в течение 2 часов после забора крови.

Стабильность: При температуре 2-8 0C кисла фосфатаза будет стабильна в течение 3 дней.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:
Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Универсальные контроли	Кат. №	Описание	Кат. №
Уровень 1	AD922	Фотометр	нет
Уровень 2	AD932	Общее лабораторное оборудование	нет

Процедура определения:
Длина волны: 405 нм
Температура: 370C
Длина оптического пути: 1 см

Общая кислая фосфатаза	Бланк	Калибратор	Образец
Реагент 2	900 μл	900 μл	900 μл
Образец	-----	-----	60 μл
Калибратор	-----	60 μл	-----
Аккуратно перемешайте и поставьте в термостат на 5 мин. Измеряйте оптическую плотность (OD) на водяном и воздушном бланке
Снимите точные показания абсорбции каждую минуту в течении 3 минут и высчитайте среднее значение в минуту (∆ODbs).

Непростатическая кислая фосфатаза	Бланк	Калибратор	Образец
Реагент 2, 3 (смесь реагентов)	900 μл	900 μл	900 μл
Образец	-----	-----	60 μл
Калибратор	-----	60 μл	-----
Аккуратно перемешайте и поставьте в термостат на 5 мин. Измеряйте оптическую плотность (OD) на водяном и воздушном бланке. Снимите точные показания абсорбции каждую минуту в течении 3 минут и высчитайте среднее значение в минуту (∆Аbs).

Калибровка:
Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор:

• Используете новый комплект реагентов или меняете номер партии
• Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
• Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:
Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.
Контроли должны подвергаться анализу:

• Когда получен предварительный отчет о результатах анализов пациента.
• Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
• В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

Концентрация кислой фосфатазы = ∆Аbs/мин образца x 1250 (U/l)
Концентрация простатической кислой фосфатазы = Конц. общей кислой фосфатазы – конц. не простатической кислой фосфатазы (U/l)
(Коэффициент пересчета: U/l = 60 x μkat/l ).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

Общая кислая фосфатаза	U/l	μkat/л
Мужчины	до 4.8	до 0.08
Женщины	до 3.7	до 0.062

Каждая лаборатория должна установить свою собственную нормированную область значений.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность:
Линейность метода до 40 U/l (0.67 μkat/l)
Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:1 с 0.9% NaCl. Результат соответственно увеличится в 2 раза.

Чувствительность: 2 U/l (0.03 μkat/l)

Точность:

Внутрисерийная N = 20	Среднее значение (U/l)	SD	%CV	Межсерийная N = 20	Среднее значение (U/l)	SD	% CV
Уровень 1	2.4	0.038	1.50	Уровень 1	2.51	0.051	2.02
Уровень 2	11.83	0.086	0.73	Уровень 2	12.0	0.217	1.81

Метод сравнения:
Сравнение образцов с использованием этих реагентов кислой фосфатазы (y) и другими доступными реагентами (x), дали следующие результаты:

N = 20

y = 0.9709 x + 1.10

r = 0.9981

БИБЛИОГРАФИЯ:

1. Textbook of Clinical Chemistry, Tietz NW (1999)
2. Young DS et al., Clin Chem 21 302D (1975)
3. Hillman G., Z Klin. Chem. Klin Biochem. 9, 273 (1971)