Креатинкиназа (CK-MB)

КРЕАТИНКИНАЗА (CK-MB)

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат. №.	Количество	Реагент	Хранение
AD805CB	10 x 15 мл 2 x 15 мл 1 x 2 мл	КРЕАТИНКИНАЗА MB - 1 КРЕАТИНКИНАЗА MB - 2 КРЕАТИНКИНАЗА MB - калибратор	2-8°C
AD815CB	5 x 50 мл 1 x 50 мл 1 x 2 мл	КРЕАТИНКИНАЗА MB - 1 КРЕАТИНКИНАЗА MB - 2 КРЕАТИНКИНАЗА MB - калибратор	2-8°C

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для количественного определения креатинкиназы (CK-MB) в сыворотке и плазме рекомендованного Международной организацией клинической химии (IFCC) на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Реагент СК – это фермент, имеющий 4 различные формы: митохондральный изофермент и 3 цитоплазматических изофермента: CK MM – мышечный, CK BB –мозговой, CK MB – сердечный. Активность сыворотки крови может быть следствием повреждения сердечной мышцы или скелетной мускулатуры, при нарушениях ЦНС, гипотиреозе, ранней диагностике инфаркта миокарда, когда увеличение изоэнзима наблюдается уже через 3-8 часов после острого приступа.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Метод основан на остаточной активности креатинкиназы после ингибирования активности субъединицы М(99.6%) с помощью специфических антител. Этим методом определяется только активность Б-субъединицы, составляющей половину активности МБ фракции. До определения СК-МВ-фракции необходимо определить активность общей креатинкиназы (метод с NAC-активатором).

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики.

Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить показания анализа.

Цвет и вид компонентов:

Реагент 1: прозрачная бесцветная жидкость

Реагент 2: прозрачная светло-желтая жидкость

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности: В соответствии с европейскими стандартами продукт не представляет опасности. Данные реагенты содержат азид натрия. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности:

1. Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
2. Не замораживайте реагенты.
3. Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
4. Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
5. Следуйте требованиям по утилизации продукта.

ОБОРУДОВАНИЕ:

Описание по использованию оборудования предоставляется по запросу.

Компоненты	Ингредиенты	Концентрация в тестах
Реагент 1	Имидазольный буфер pH 6.7	100 ммоль/л
	Глюкоза	20 ммоль/л
	Ацетат магния	10 ммоль/л
Реагент 1 (condt)	ЭДТА	2.0 ммоль/л
	АДФ	2.0 ммоль/л
	АМФ	5.0 ммоль/л
	НАДФ	2.0 ммоль/л
	CK-M антитела к М-субъединице	8000 U/l
	Гексокиназа (HK)	> 2.5 U/мл
	N- ацетилцистеин	20 ммоль/л
Реагент 2	Креатинфосфат	30 ммоль/л
	G6P-DH	> 1.5 U/мл
	Диаденозинпентафосфат	10 µмоль/л
	Антикоагулянты	-----
Калибратор	CK-MB	Специальный лот

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ:

Перед использованием аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом.

При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на бирке.

Монореагентная методика: смешайте 1 часть Реагента 2 с 5 частями Реагента 1. При температуре 2-8°C рабочий реагент стабилен 20 дней.

Биреагентная методика: жидкие Реагенты 1и 2 готовы для использования.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку, свободную от гемолиза, гепарин/EDTA плазму.

При работе с образцами рекомендуется придерживаться требований NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец должен набираться только в специально предназначенный для этого контейнер. Сыворотку/плазму необходимо отделить от клеток крови немедленно после забора крови, хранить в темном месте.

Стабильность: до 7 дней при 2-8°C.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Описание	Кат. №	Описание	Кат. №
CK-MB контроль	AD915	Фотометр	нет
CK-MB калибратор	AD965	Общее лабораторное оборудование	нет

Процедура определения:

Длина волны: λ= 340 (334/365) нм

Температура: 300C (25°C или 37°C)

Оптический путь: 1 см.

Монореагентная методика	Бланк	Образец
Рабочий реагент	1000 µл	1000 µл
Образец	-----	40 µл
Аккуратно смешать, инкубировать 2 мин. при 30°C или 37°C. В течение следующих 3 минут измеряйте абсорбцию каждую минуту (∆А/мин). Вычислить среднее значение за минуту (∆А).

Расчет по фактору:

340 нм: U/l = ∆OD/мин x 8352

334 нм: U/l = ∆OD/мин x 8414

365 нм: U/l = ∆OD/мин x 14858

Биреагентная методика:	Контрольная проба	Калибратор	Образец
Реагент 1	1000 µл	1000 µл	1000 µл
Образец	----	----	40 µл
Калибратор	----	40 µл	----
Аккуратно смешайте, инкубируйте 5 мин. при 37°C
Реагент 2	200 µл	200 µл	200 µл
Аккуратно смешать, инкубировать 2 мин. при 30°C или 37°C. В течение следующих 4 минут измеряйте абсорбцию каждую минуту (∆OD/мин). Вычислить среднее значение за минуту (∆OD).

Расчет по фактору:

340 нм: ед/л = ∆OD/мин x 9938

334 нм: ед/л = ∆OD/мин x 10012

365 нм: ед/л = ∆OD/мин x 17681

*Вышеуказанные факторы должны быть указаны в инструкции к калибратору CK-MB.

Калибровка:

Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор если:

1. Используете новый набор или меняете номер партии реагентов.
2. Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
3. Контроли качества за пределами допустимой нормы.

(ПРИМЕЧАНИЕ: CKMB калибратор продается отдельно: кат.№ AD975)

Контроль качества: Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.

Контроли должны подвергаться анализу:

1. Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
2. Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
3. В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

340 нм: ед/л = ∆OD/мин x 8352

334 нм: ед/л = ∆OD/мин x 8414

365 нм: ед/л = ∆OD/мин x 14858

Коэффициент пересчета: μkat/l = U/l x 0 0167

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

Инфаркт миокарда: вероятность инфаркта в 3 случаях:

			ед/л при 25°C1	µkat/l при 25°C	ед/л при 30°C4	µkat/l при 30°C	ед/л при 37°C*	µkat/l при 37°C
1.	CK	мужчины	> 80	> 1.33	> 130	> 2.17	>190	> 3.17
		женщины	> 70	> 1.17	> 110	> 1.83	> 167	> 2.87
2.	CK- MB		> 10	> 0.17	> 15	> 0.25	> 24	> 0.40
3.	Активность CK-MB составляет 6 – 25% от общей активности CK1

* Температурный коэффициент пересчета от: 25°C до 30°C - 1.53; от 25°C до 37°C - 2.38.

Каждая лаборатория должна установить свою собственную нормированную область значений.

Полученные значения должны быть оценены с историей болезни, клиническими обследованиями и другими анализами.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность: Линейность до 500 U/L (8.35 µkat/l).

Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:1 с 0.9% NaCl и еще раз подвергните анализу. Результат увеличить в 2 раза.

Интерференция:

Желтуха: нарушение менее 10% при показателях билирубина (и фракций) до 600 µмоль/л.

Гемолиз: нарушение менее 10% при показателях гемоглобина до 1.25 г/л.

Липемия: нарушение менее 10% при показателях триглицеридов до 2.5 г/л.

Чувствительность: 43 ед/л (0.05 µkat/l).

Точность:

Внутрисерийная N =20	Среднее значение (ед/л)	SD	%CV	Межсерийная N =20	Среднее значение (ед/л)	SD	% CV
Уровень 1	172.1	4.88	2.83	Уровень 1	165.4	5.58	3.37
Уровень 2	776.4	13.46	1.73	Уровень 2	740.2	15.26	2.06

Метод сравнения:

Сравнение 50 образцов с использованием этих реагентов креатинкиназы (y) и другими доступными реагентами (x), дают следующие результаты.

y = 0.976x – 0.269

r = 0.999

Ранг образца: от 0 до 329 ед/л

БИБЛИОГРАФИЯ:

1. Stein W. Med Weit. 1985, 36:572 & Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fund. Of Clin. Chem. 5th ed. 30-54, 352-390 and 974-975
2. GuderWG, NarayananS, WisserH, ZawtaB. List of Anal; Preanal Variables. the Patient to the Laboratory. Darmstdt:GIT Verlag 1996.
3. Wurzburg U, Hennrich N, Lang H, Prellwitz W, Neumeier D, Knedel M. Klin. Wschr. 1976: 54 and 357.
4. Szasz G, Busch EW. Third European Congress of Clinical Chemistry, Brighton, England, 3-8 June 1979 (abstract).