Лактатдегидрогеназа (LDH (P-L) DGKC

Лактатдегидрогеназа (LDH (P-L) DGKC)

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат. №.	Количество	Реагент	Хранение
AD739LD	10 x 15 мл 2 x 15 мл	ЛДГ DGKC - 1 ЛДГ DGKC - 2	2-8°C
AD749LD	5 x 50 мл 1 x 50 мл	ЛДГ DGKC - 1 ЛДГ DGKC - 2	2-8°C

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для определения лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в сыворотке, рекомендованного Германским обществом клинической химии (DGKC), на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Лактатдегидрогеназа (LDH) локализируется в цитоплазме. Наибольшая концентрация ЛДГ в скелетных мышцах, печени, сердце, почках и эритроцитах. Существует как минимум 5 изоэнзимов (изоферментов) состоящих из 4 субъединиц пептидов двух разных типов, обозначенный буквой «М» для скелетной мышцы и «Н» для сердца. Так как LDH не является характерным энзимом ткани, то он усиливает многие состояния организма, например: вирусный гепатит, цирроз и рак печени, сердечные заболевания (инфаркт), опухоль на легких, гемолитические заболевания и заболевания почек.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Кинетический метод заключается в превращении пирувата в лактат с последующим окислением NADH в NAD+. Значение NAD+ прямо пропорционально значению лактатдегидрогеназы в образце:

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики. Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить порядок выполнения анализа.

Цвет и вид компонентов:

Реагент 1: Прозрачная бесцветная жидкость.
Реагент 2: Прозрачная, светло-желтая жидкость (имеет тенденцию темнеть в зависимости от возраста пациента, но на показатели анализа не влияет).

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности:
Внимание: Данные реагенты содержат азид натрия, поэтому придерживайтесь всех необходимых мер безопасности при работе с ними в лаборатории. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности при использовании:

• Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
• Не замораживайте реагенты.
• Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
• Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
• Следуйте требованиям по утилизации продукта.

ОБОРУДОВАНИЕ:

Описание по использованию оборудования предоставляется по запросу.

СОСТАВ РЕАГЕНТОВ:

Компоненты	Ингредиенты	Концентрация в пробниках
Реагент 1	Фосфатный буфер pH 7.5 Пируват Антикоагулянты	70 ммоль/л 0.7 ммоль/л ------
Реагент 2	NADH Стабилизаторы и антикоагулянты	1.1 ммоль/л ------

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТА И ЕГО СТАБИЛЬНОСТЬ:

Перед использованием хорошо и аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом. При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на этикетке.

Монореагентная методика: добавьте 1 часть Реагента 2 к 2.5 частям Реагента 1. Рабочий Реагент стабилен 2 недели при температуре 2-8 °C.
Биреагентная методика: жидкие Реагенты 1 и 2 готовы для использования.
После вскрытия, при правильном хранении, компоненты остаются стабильными до окончания срока годности.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку, свободную от гемолиза. Может быть использована гепаринизированная/ЭДТА плазма. В работе с образцом рекомендуется придерживаться методики работы NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец необходимо набрать в соответствующий контейнер, предназначенный для этого образца. Сыворотка должна быть отделена от клеток сразу же после забора.
Стабильность: до 4 дней при температуре 2-8°C3.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимые материалы (отсутствуют в данном наборе)

Описание	Кат.№	Описание	Кат.№
Калибратор	AD983	Общее лабораторное оборудование	Нет
Универсальная контрольная сыворотка Уровень 1	AD922	Фотометр	Нет
Универсальная контрольная сыворотка Уровень 2	AD932	Соляной раствор 0.9 г/л NaCl	Нет

Проведение процедуры:
Длина волны: 340 нм(Hg 334 - 365)
Температура: 30°C (25°C or 37°C)
Оптическая длина: 1 см

Монореагентная методика	Контрольная проба	Калибратор	Образец
Рабочий реагент	1000 μл	1000 μл	1000 μл
Образец	----	----	20 μл
Калибратор	----	20 μл	----
Аккуратно смешайте и инкубируйте 1 мин. при 30°C (37°C). В течение следующих 3 минут каждую минуту замеряйте оптическую плотность в минуту (∆OD/мин). Найдите среднее значение.

Для расчета активности фермента:
340 нм U/l = ∆OD/мин x 8095
334 нм: U/l = ∆OD/мин x 8252
365 нм: U/l = ∆OD/мин x 15000

Биреагентная методика	Контрольная проба	Калибратор	Образец
Реагент 1	1000 μл	1000 μл	1000 μл
Образец	----	----	20 μл
Калибратор	----	20 μл	----
Аккуратно смешайте и инкубируйте 5 мин. при 37°C
Реагент 2	240 μл	240 μл	240 μл
Аккуратно смешайте и инкубируйте 1 мин. при 37°C В течение следующих 4 минут каждую минуту замеряйте оптическую плотность в минуту (∆OD/мин). Найдите среднее значение

Фактор подсчета:
340 нм U/l = ∆OD/мин x 9681
334 нм: U/l = ∆OD/мин x 9869
365 нм: U/l = ∆OD/мин x 17880
*Вышеуказанные факторы должны быть указаны в инструкции к калибратору (AD973).

Калибровка:
Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор перед использованием:

• Используете новый набор или меняете номер партии реагентов.
• Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
• Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:
Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.
Контроли должны подвергаться анализу:

• Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
• Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
• В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

Монореагентная методика:
340 нм: U/l = ∆OD/мин x 8095 334 нм: U/l = ∆OD/мин x 8252 365 нм: U/l = ∆OD/мин x 15000

Биреагентная методика:
340 нм: U/l = ∆OD/мин x 9681 334 нм: U/l = ∆OD/мин x 9869 365 нм: U/l = ∆OD/мин x 17880
*Вышеуказанные факторы должны быть указаны в инструкции к калибратору (AD973).
(Коэффициент пересчета: µKat/l = U/l x 0.0167).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

25°C 30°C 37°C

Сыворотка	120 – 240 U/l	161 - 322 U/l	240 - 480 U/l
	2 – 4 µkat/L	2.7 – 5.3 µkat/L	4 – 8 µkat/L

Каждая лаборатория должна установить свою собственную нормированную область значений. Полученные результаты всегда необходимо сравнивать с результатами анализов пациента и его историей болезни.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность:
Линейность до 1224U/l (20 µkat/L).
Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:1 с 0.9% NaCl (9г/л) и еще раз подвергните анализу. Результат увеличится в 2 раза.

Интерференция:
Желтуха: нарушение менее 10% при показателях билирубина (и фракций) до 600 µмоль/л.
Гемолиз: нарушение менее 13% при показателях гемоглобина до 1.25 г/л.
Липемия: нарушение менее 10% при показателях триглицеридов до 5 г/л.

Чувствительность: До 13 U/l (0.2 µkat/L).

Точность:

Внутрисерийная N = 20	Среднее значение (U/l)	SD	% CV	Межсерийная N = 20	Среднее значение (U/l)	SD	% CV
Уровень 1	321	4.85	1.51	Уровень 1	317	8.02	2.53
Уровень 2	513	11.70	2.28	Уровень 2	483	9.93	2.06

Метод сравнения:

Сравнение 50 образцов с использованием этих реагентов ЛДГ (y) и другими доступными реагентами (x), дали следующие результаты.

y = 0.992x +3.093

r =0.999

Диапазон образца: 98 - 1598 U/l

БИБЛИОГРАФИЯ:

1. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fund. Of Clin. Chem. 5th ed. 30-54, 362-366 and 993.
2. Ann. Biol. Clin. 40 (1982) 123.
3. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes;Pre-analytical Variables. Brochure in: Samples: the patient to the Laboratory. Darmstadt: GIT Verlag, 1996.