Липаза

ЛИПАЗА

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат. №.	Количество	Реагент	Хранение
AD537L	4 x 10 мл	ЛИПАЗА - 1	2-8°C
	1 x 8 мл	ЛИПАЗА - 2

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для количественного определения липазы в сыворотке и плазме человека на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Липаза – фермент катализирующий расщепление триглицеридов на глицерин и высшее жирные кислоты. Этот энзим в организме человека вырабатывается рядом органов и тканей, что позволяет различать липазу желудочного происхождения, поджелудочной железы, липазу легких и т.д. Наиболее важной с клинической точки зрения является липаза поджелудочной железы. Она играет главную роль в переваривании жиров. Определение активности липазы в крови – наиболее информативный критерий диагностик острого панкреатита. Содержание липазы увеличивается и снижается параллельно повышению и снижению активности α-амилазы, но нормализация ее уровня происходит позже нормализации амилазы. Иногда уровень липазы в крови повышается раньше, чем увеличивается активность амилазы и остается повышенным длительное время. При остром панкреатите активность липазы в крови увеличивается в течение 4-8 часов после острого приступа, достигая максимума через 24 часа, снижение наблюдается через 8-14 дней.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Метод базируется на гидролизе специфического хромогенного субстрата липазы 1,2-O-дилаурил-рэк-глицеро-3-глютаровая кислота-(6-метил-ресоруфин) эстер, эмульгированного желчными кислотами. Активность энзима определяется взаимодействием желчной кислоты и колипазы. Фактически активность липазы не определяется без колипазы, которая активирует липазу панкреатической железы, не влияя на активность других энзимов в сыворотке крови. Высокое содержание холатов препятствует взаимодействию эстеразы с хромогенами, что приводит к повышению поверхностного отрицательного заряда. Измерение активности панкреатичекой липазы базируется на кинетическом колометрическом методе. Серия реакций, используемая в данном методе, является прямым энзиматическим прямым определением липазы. Уровень образования метилресоруфина, измеряется фотометрически, и пропорционален активности липазы в образце.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики. Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить порядок выполнения анализа.

Цвет и вид компонентов:
Реагент 1: Прозрачная бесцветная жидкость.
Реагент 2: Мутная оранжевая микро-эмульсия. Если Реагент 2 стал красного цвета, он не пригоден для использования.

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности:
Внимание: придерживайтесь всех необходимых мер безопасности при работе с реагетами в лаборатории. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности при использовании:

1. Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
2. Не замораживайте реагенты.
3. Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
4. Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
5. Следуйте требованиям по утилизации продукта.

СОСТАВ НАБОРА:

Компонент	Ингридиенты	Ингредиенты	Концентрация
Реагент 1		TRIS Буфер pH 8.3	40 ммоль/л
		Колипаза	≥ 1 мг/л
		Дезоксихолат	1.8 ммоль/л
		Тауродезоксихолат	7.2 ммоль/л
Реагент 2		Тартрат pH 4.0	15 ммоль/л
		Субстрат липазы	≥ 0.7 ммоль/л
		Хлорид кальция	0.1 ммоль/л

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ:

Реагент 1 и 2 готовы для использования. Стабильность после вскрытия 90 дней при 2-8°C с плотной закрытой крышкой.
Перед использованием аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом.
При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на этикетке.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку или гепарин-плазму.14 НЕ ИСПОЛЬЗОВАТЬ: ЭДТА, цитрат и флюорид. В работе с образцом рекомендуется придерживаться методики работы NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец необходимо набрать в соответствующий контейнер, предназначенный для этого образца.
Стабильность: до 2 дней при 2-8°C.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Описание	Кат. №	Описание	Кат. №
Калибратор	AD983	Спектрофотометр или фотоколориметр (с λ=580 нм)	нет
Универсальный контроль Уровень 1	AD922
Универсальный контроль Уровень 2	AD932

Процедура определения:
Длина волны: λ 578 нм
Температура: 37°C
Оптический путь: 1 см

			Бланк	Калибратор	Образец
Реагнет 1			1000 µл	1000 µл	1000 µл
Образец			----	----	10 µл
Калибратор			----	10 µл	----
	Аккуратно перемешайте и инкубируйте 3 мин. 37°C.
Реагент 2	200 µл 200 µл 200 µл
	Аккуратно перемешайте и инкубируйте при 37°C. Измеряйте оптическую плотность (OD) через 2мин. по бланку. Считайте ∆ Аbs против калибратора, бланка и образца в мин.

Калибровка:

Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор перед использованием:

1. Используете новый набор или меняете номер партии реагентов.
2. Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
3. Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:

Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.
Контроли должны подвергаться анализу:

1. Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
2. Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
3. В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

Концентрация липазы = ∆ Аbs образца / ∆ Аbs калибратора x концентрация калибратора

(Коэффициент пересчета: µkat/l = U/l х 0.017).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

	U/l	µkat/l
Взрослые	5.6-51.3	0.51-3.57

Эти значения должны использоваться как базовые. Полученные результаты всегда необходимо сравнивать с результатами анализов пациента и его историей болезни.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность: до 250 U/l.
Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:10 с 0.9% NaCl (9г/л) и еще раз подвергните анализу. Результат увеличить в 10 раз.

Интерференция:

Желтуха: отсутствует при показателях билирубина до 20 мг/дл.
Гемолиз: отсутствует при показателях гемоглобина до 150 мг/дл.
Липемия: нарушение менее 10% при показателях триглицеридов до 300 мг/дл.

Чувствительность: нижний предел обнаружения 5 U/l.

Точность:

Внутрисерийная N = 21	Среднее значение (U/l)	SD	%CV	Межсерийная N = 11	Среднее значение (U/l)	SD	% CV
Уровень 1	119	4.13	3.34	Уровень 1	119	5.43	4.54
Уровень 2	215	5.97	2.78	Уровень 2	215	10.7	5.02

Метод сравнения:
Сравнение 100 образцов с использованием этих реагентов липазы (y) и другими доступными реагентами (x), дают следующие результаты.

y = 0.50054x + 3.9443

r = 0.997

БИБЛИОГРАФИЯ:

1. Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag, 1995.
2. Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik fur die Praxis, 2nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag, 1991:354-361.
3. Kazmierczak S, Catrou P, Van Lente F. diagnostic accuracy of pancreatic enz. evaluated by use of multivariate data analysis. Clin. Chem. 1993; 39:1960-1965.
4. Steinberg WM, Goldstein SS, Davies ND et al. Diagnostic assays in acute pancreatitis [Review]. Ann Intern Med 1985; 102:576-580.
5. Panteghini M et al. Diagnostic value of four assays for lipase determination in serum: A comparative reevaluation. Clin Biochem 1991; 24:497-503.
6. Tietz NW et al. Lipase in serum – the elusive enzyme: An overview. Clin Chem 1993; 39:746-756.
7. Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders, 1995:865.
8. Neumann U et al. New substrates for the optical determination of lipase. EP 207252 (1987).
9. Bordstrom B. The action of bile salts and other deter. on pancreatic lipase and the interaction with colipase. Biochimica et Biophysica Acta 1977; 488:381-391.
10. Gargouri Y, Julien R, Bois A et al. Studies on the detergent inhibition of pancreatic lipase activity. J of Lipid Research 1983; 24:1336-1342.
11. Leybold A, Junge W. Importance of colipase for the measurement of serum lipase activity. Adv Clin Enzymol 1986; 4:60-67.
12. Guder W, Fonseca-Wollheim W, Heil O et al. Maximun permissible transport and storage times for analysis of blood (serum, plasma), urine and cerebrospinal fluid. DG Klinische Chemische Mitteilungen 1995; 26:207-224.
13. Junge W, Abicht K, Goldman J et al. Evaluation of the Colorimetric Liquid Assay for Pancraetic Lipase on Hitachi Analysers in 7 Clinical Centres in Europe, Japan and USA. Clin Chem Lab Med 1999; 37, Special Suppl: 469.
14. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin. Chem The C.V Mosby Co. St Louis Toronto. Princeton 1984; 1130-1134, 892.